Наиболее известный способ идентификации активированных клеток заклю-чается в определении у этих клеток под световым микроскопом морфологи¬ческих изменений, называемых бласттрансформацией.

В Т- и В-лимфоцитах, находящихся в фазе Gx, между 12 и 24 ч начинает увеличиваться масса как ядра, так и цитоплазмы, появляется крупное ядрышко и наблюдается фрагментация эухроматина. При этом, как видно в электронный

микроскоп, эндоплазматический ретикулум, полирибосомы и аппарат Гольджи находятся в цитоплазме. Количество таких клеток (бластов) можно определить с помощью гемоцитометра, идентифицируя их по наличию морфологических особенностей или с помощью электронных счетчиков клеток, исходя из объема клеток (объем бласта в 3—30 раз больше, чем объем «покоящейся» клетки). Основным изменением в структуре ядра оказывается увеличение объема меж-хроматинового вещества, обусловленное накоплением новосинтезированных белков, в том числе сократительных, например актина. В связи ...

Хотя в покоящемся лимфоците, находящемся в фазе G0 клеточного цикла, ДНК не синтезируется, тем не менее в нем с небольшой скоростью идет синтез РНК и белков. Новообразованная РНК оказывается гетерогенной по размеру, а ее синтез компенсирует деградацию. На электронных микрофотографиях видно, что одиночные рибосомы рассеяны по цитоплазме. Из всей РНК покояще¬гося лимфоцита 85% приходится на рибосомную (рРНК).

Увеличение синтеза РНК вызывается стимуляцией лимфоцитов из пред-ставителей многих видов с помощью разнообразных митогенов и, по-видимому, является универсальным звеном активационной программы. Чаще всего за
ходом синтеза РНК следят по включению 3Н-уридина в кислотонерастворимую внутриклеточную фракцию за единицу времени. G помощью этого метода невозможно отличить усиление транспорта уридина (при котором количество меченой РНК может увеличиться за счет увеличения удельной радиоактивности пула предшественников) от повышения активности РНК-синтетаз. Кроме т ...

Используя меченные флуоресцеином Fab-фрагменты антител к иммуногло-булинам, связанным с мембранами В-клеток, можно увидеть, что иммуногло-булины распределены по поверхности клетки довольно равномерно. Однако если вместо Fab-фрагментов взять бивалентные антитела, способные сшивать молекулы поверхностных иммуноглобулинов, то последние тут же преципити-руют в мембране с образованием флуоресцирующих пятен неправильной формы (пэтчей). Ингибировать образование пэтчей можно, лишь используя факторы, уменьшающие текучесть внешнего слоя плазматической мембраны — например, добавляя стеролы или понижая температуру.

За несколько минут образования пэтчей они соединяются с актином и мио-зином на внутренней стороне мембраны (рис. 12.2), затем объединяются друг с другом и мигрируют к одному из концов клетки (рис. 12.4). Флуоресценция концентрируется на одном полюсе клетки, напоминая при рассматривании в флуоресцентный микроскоп лунный серп. Поэтому ее называют колпачком (кэпом). Кэп може ...

При активации тучных клеток посредством сшивки Рсс-рецепторов одним из самых ранних процессов, по-видимому, является активация мембранно-связанной эстеразы. Этот фермент ингибируется диизопропилфторофосфатом (ДФФ), который ковалентно связывается с сериновым остатком активного центра. Помимо эстеразы таким же образом ингибируются трипсин, химотрип-син, калликреин, плазмин и несколько других важных протеиназ. Путем активации аденилат-циклазы сериновая эстераза, как сейчас представляется, передает сигнал, вызывающий дегрануляцию тучных клеток. Кроме того, эстеразы, активируемые под действием внешнего сигнала, обнаружены также в тромбоцитах и нейтрофилах.
Имеются данные, согласно которым сериновая эстераза может быть акти-вирована в течение нескольких минут после сшивки поверхностных иммуно-глобулинов лимфоцита с помощью соответствующих антител. Поскольку ДФФ ингибирует резкое увеличение подвижности компонентов мышиных В-клеток, индуцируемое антителами против иммуноглобулинов, то во ...

Установлено, что фрагменты компонента СЗ-системы комплемента ингиби-руют пролиферацию Т-клеток в ответ на воздействие митогенов или аллогенных клеток и образование цитотоксических клеток в смешанной культуре лимфоци¬тов человека [70]. Пролиферация может быть прервана, даже если она уже началась. Кроме того, in vivo фрагменты СЗ тормозят синтез антител в ответ на стимуляцию с помощью антигена. Наибольшая активность обнаружена у фраг¬мента с кислотными свойствами, имеющего мол. массу от 6 до ЮкДА и являю¬щегося, по-видимому, СЗе; однако, по имеющимся данным, СЗс и C3d также обладают ингибирующей активностью. ...

Пектинами называют большую группу связывающих углеводы муль-тимерных гликопротеинов, выделяемых из растительных и животных источни¬ков [6]. Многие лектины связываются с мембранными белками, поскольку в выступающих участках этих белков часто обнаруживаются гидрофильные углеводные группы. При этом определенные лектины предпочтительно связы-ваются с клетками лишь некоторых типов, так как углеводы, расположенные на поверхности клеток разных типов, отличаются друг от друга, а сродство данного лектина по отношению к разным углеводам неодинаково. Эксперимен¬тально специфичность лектина определяется по ингибированию различными сахарами связывания его с клетками. В большинстве случаев сложные олиго-сахариды оказываются даже лучшими ингибиторами, чем самые эффективные моносахариды. Однако специфичность связывания лектина с клетками опреде-ленного типа часто носит стертый характер, поскольку разнообразие гликопро-теинов велико, а набор углеводов, входящих в их состав, довольно ограничен. Кроме то ...

В самых разнообразных клетках регуляторные сигналы, инициированные гормонами и другими лигандами, связывающимися с рецепторами на плазма-тической мембране, передаются в клетку с помощью циклических нуклеотидов. Рецепторы всех типов, участвующие в связывании лиганда, могут предпочти-тельно активировать либо аденилат-циклазу, либо гуанилат-циклазу — ферменты, локализованные во внутреннем слое плазматической мембраны. В результате этой активации, осуществляемой с помощью Са2+-зависимого механизма, происходит синтез, соответственно либо циклического аденозин-3, 5-монофосфата (сАМР), либо циклического гуанозин-3, 5-монофосфата (cGMP) Эти так называемые вторые посредники часто оказывают противоположное действие на многие клеточные процессы. Внутриклеточные концентрации цик¬лических нуклеотидов регулируются также путем их расщепления фосфоди-эстеразами. сАМР и cGMP, по-видимому, оказывают свое действие, связываясь с регуляторными субъединицами протеинкиназных комплексов, в которых ката¬ли ...

Из зародышей пшеницы были выделены три активных компонента белко¬вой природы, один из которых — это необычный лектин, отличающийся от дру¬гих лектинов отсутствием в своем составе углеводов. Способность АЗП связываться с олигосахаридами, содержащими N-ацетилглюкозамин, позволяет ему сорбироваться на поверхности разнообразных клеток. Хотя АЗП легко диссо-циирует при кислых значениях рН на субъединицы с мол. массой 18 кДа,при физиологических условиях он, по-видимому, представляет собой димер. АЗП может вызывать образование колпачков из молекул рецепторов (кэппинг), но даже при оптимальных концентрациях стимулирует лишь кратковременный синтез ДНК. Показано, что его присутствие препятствует активации клеток под действием Кон А, хотя АЗП и не конкурирует за связывание с акцепторами Кон А. АЗП не является митогеном, однако он, как и Кон А, может индуциро¬вать фосфорилирование белков и ранний белковый синтез, а также усиливать транспорт аминокислот [17]. На примере АЗП видно, что отдельные мол ...

Кальциевые ионофоры, например А23187, внедряются в плазматическую мембрану и образуют ионные каналы, по которым кальций (Са2+) быстро устрем-ляется в клетку. В случае лимфоцитов через несколько дней после этого начи-нается включение тимидина. Одним из непосредственных следствий проникно-вения кальция внутрь клетки может быть активация находящейся в мембране фосфолипазы А—2, которая отщепляет жирные кислоты от мембранных фосфо-липидов. Если вместе с митогенами в оптимальных для стимуляции концентра¬циях добавлять ионофоры, то часто имеет место ингибирующий эффект. При субоптимальных концентрациях митогена ионофор может повысить эффектив¬ность стимуляции. ...

Как уже говорилось, экспериментальная литература по активации мито-генами довольно обширна, тогда как данные по активации антигенами значи¬тельно более ограничены. Если мы не устоим перед почти непреодолимым соблаз¬ном распространить закономерности митогенной активации на антигенную, то неизбежно столкнемся с тем фактом, что набор мембранных молекул, сшива-ющихся митогеном и антигеном, неодинаков. Даже несмотря на предположение о том, что поздние процессы, такие, как синтез РНК и ДНК, в ответ на воздейПока не ясно, действительно ли для ингибирования необходимо, чтобы этот Fc-рецептор находился на той же самой В-клетке, что и IgM, или же он может быть на вспомогательной (accessory) клетке. Тем не менее представляется более вероятным, что Fc-рецепторы В-клеток участвуют в кокэппинге с поверхностны¬ми IgM, если их сшить вместе с помощью целых анти-ц,. Возможно, этот «нега¬тивный сигнал» через FCy-рецепторы также имеет какое-то отношение к неспо¬собности целых антител, связывающих Fc-рецеп ...